1、 怎樣提高點(diǎn)樣效率
點(diǎn)樣是造成TLC定量誤差的主要來(lái)源。實(shí)驗證明：定量毛細管更適合較小體積的點(diǎn)樣；微量注射器更適合較大體積的點(diǎn)樣。這主要是因為微量注射器受小氣泡、溶液回爬現象的影響較大。為避免不同定量毛細管間的點(diǎn)樣誤差、建議一塊薄層板上用同一只定量毛細管。但應注意更換樣品時(shí)，應將毛細管用超聲波或不同極性溶劑清洗干凈。在制備樣品時(shí)，溶樣溶劑黏度不能過(guò)高，以便于點(diǎn)樣；溶劑沸點(diǎn)過(guò)低則進(jìn)樣體積易變，過(guò)高則會(huì )改變展開(kāi)劑組成；對樣品溶解度過(guò)高會(huì )使樣點(diǎn)發(fā)生空心現象；常用的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮。經(jīng)典TLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑3mm點(diǎn)間距1--2cm 底邊距1.5cm；HPLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑1mm點(diǎn)間距5mm 底邊距1cm。
2、展開(kāi)劑的選擇
TLC與HPLC相比，一個(gè)突出的優(yōu)點(diǎn)就是流動(dòng)相的選擇具有更大的靈活性。流動(dòng)相的選擇的目的是使絕大部分樣品的RF值位于0.1--0.7之間并達到較好的分離，與此對應的是流動(dòng)相要有適當的強度和組成。流動(dòng)相強度越大，溶質(zhì)RF值越大，但很可能降低分離能力；另外單一溶劑很難分離較復雜的混合物，根據相似相溶原理，要使用多元溶劑體系。一般展開(kāi)劑體系選擇如下：根據分離樣品性質(zhì)、薄層色譜板性質(zhì)選擇一個(gè)二元溶劑體系，通過(guò)調節溶劑比例以尋求適合RF值，適合的RF值找到后，再尋求極性參數相同的二元溶劑體系兩個(gè)，以這三個(gè)組成為三點(diǎn)組成一個(gè)三角形，則可看到：三角形頂點(diǎn)是二元體系，邊是三元體系，三角形內是四元體系，并且極性一致，可根據幾何原理得出任一點(diǎn)組成。這種方法較為直觀(guān)，也較簡(jiǎn)單。
3、TLC的通用顯色方法
理想的顯色希望靈敏度高、斑點(diǎn)顏色穩定、斑點(diǎn)與背景間的對比度好、斑點(diǎn)的大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比。在樣品組成并不*已知的情況下，通用顯色方法顯得成尤為重要。通用顯色法主要有：
?。?）、紫外照射法：方便，不破壞樣品；
?。?）、碘蒸氣法：通用性強，與紫外法結合靈敏度高于該兩法單獨使用；
?。?）、熒光試劑：制造熒光背景，使原來(lái)紫外下無(wú)熒光物質(zhì)被鑒別，有熒光物質(zhì)更明顯；
?。?）、硫酸溶液：對絕大多數有機物有效，但有破壞性。
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