干貨丨關(guān)于中藥禁用農藥檢測混標選擇及使用的一些小建議

《中國藥典》2020版 已經(jīng)正式實(shí)施，關(guān)于農殘檢測有很大變化，主要是通則2341增加了第五法禁用農藥的檢測方法，隨著(zhù)藥典的實(shí)施，植物類(lèi)中藥及飲片中不得檢出33種（55個(gè)）目標物，很多中藥企業(yè)都在開(kāi)始開(kāi)展這個(gè)實(shí)驗，但是很多老師在實(shí)驗第yi步，選擇標準品這一部分就被難住了，市場(chǎng)上很多種混合對照品，那應該如何合理選擇呢？今天小編進(jìn)行了一些問(wèn)題整理，希望可以幫助大家。

01 我們要檢測的農藥目標物有哪些？

相信很多老師通過(guò)對藥典的解讀也都有所發(fā)現，中藥材禁用農藥的檢測涉及到33種農藥，因包含同分異構體和代謝產(chǎn)物等，總計共55個(gè)目標物；根據檢測儀器又分為了氣質(zhì)質(zhì)檢測組，35個(gè)；液質(zhì)質(zhì)檢測組，31個(gè)；其中11個(gè)目標物可以同時(shí)使用兩種儀器檢測。具體情況見(jiàn)下表：

02 市場(chǎng)上有哪些商品化的中藥禁用農殘混合對照品溶液？

目前市場(chǎng)上許多廠(chǎng)家都推出了針對《中國藥典》2020版 通則2341第五法的定制化混標產(chǎn)品，按照分組和濃度情況可以分為以下幾類(lèi)：

①、按照目標物的檢測儀器分類(lèi)，主要分為3種產(chǎn)品，分別是針對GC-MS/MS檢測的35種農藥混標、針對LC-MS/MS檢測的31種農藥混標、針對所有目標物的55種禁用農藥混標。

②、按照目標物濃度分類(lèi)，主要分為2種產(chǎn)品，一種是所有目標物濃度都相同的混標產(chǎn)品，此類(lèi)產(chǎn)品的濃度通常有10ppm和100ppm；另外一種是所有目標物濃度不*相同的混標產(chǎn)品，此類(lèi)產(chǎn)品的濃度通常為2-20ppm或20-200ppm。

《中國藥典》2020版 通則0212中對于植物類(lèi)中藥材中禁用農藥的限值是不*相同的，因此，以上各種混標產(chǎn)品中chang見(jiàn)的當屬不同濃度的混標產(chǎn)品，此類(lèi)產(chǎn)品通常是根據藥典標準中的限值要求進(jìn)行倍數擴大配制得到。下面以安譜實(shí)驗 CDAA-M-490407-TX-1.2ml 55種農藥混合對照溶液產(chǎn)品為例進(jìn)行簡(jiǎn)單介紹。下圖是混合對照溶液的濃度和CAS號信息。

從表中可以看出，混合對照品溶液的濃度范圍為2-20ppm，其中大部分目標物的濃度都是依據藥典限值要求進(jìn)行了200倍的擴大，但涉及到同分異構體和代謝物的農藥時(shí)會(huì )存在一些差異，因為這些目標物的限值是2-4個(gè)物質(zhì)的和，例如表中四個(gè)六六六的濃度均為10mg/L，為限值0.1mg/kg的100倍；甲ban磷、甲ban磷砜和甲ban磷亞砜三個(gè)物質(zhì)的濃度均為4mg/L，為限值0.02mg/kg的200倍。因為藥典中并未規定對照品溶液的具體濃度，不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的混合對照品溶液中對于此類(lèi)以和計限值的農藥目標物，其具體濃度設定可能不*相同，因此大家在購買(mǎi)后一定要對其COA證書(shū)進(jìn)行仔細閱讀，確定每個(gè)目標物的濃度信息。

03 標準曲線(xiàn)的濃度是多少，如何進(jìn)行配制？

藥典標準中對于對照品溶液的制備要求如下圖所示，標準要求使用基質(zhì)標準曲線(xiàn)，給出了配制標準曲線(xiàn)的體積信息，但并沒(méi)有給出具體的濃度信息。

下表中給出55種禁用農藥混合對照品溶液的一種標曲配制濃度信息表，僅供大家參考，各位老師可以根據自己的實(shí)際情況進(jìn)行標曲濃度的設定。

表中使用商品化的2-20ppm混合標準品，使用時(shí)可以按照標準要求，取1mL標準品溶液，用乙腈定容至20mL得到配制標準曲線(xiàn)使用的混合對照品貯備溶液（0.1-1ppm），然后根據藥典標準方法，分別取10、20、50、100、150、200μL的貯備溶液進(jìn)行基質(zhì)標準曲線(xiàn)的配制。

如果使用更高濃度的商品化的20-200ppm混合標準品，使用時(shí)則需要注意濃度信息，不可按照藥典標準方法進(jìn)行配制，只需準確量取0.1mL標準品溶液，用乙腈定容至20mL得到配制標準曲線(xiàn)使用的混合對照品貯備溶液（0.1-1ppm），然后根據藥典標準方法，分別取10、20、50、100、150、200μL的貯備溶液進(jìn)行基質(zhì)標準曲線(xiàn)的配制。

按照上述的標線(xiàn)配制方法，使用直接提取法（包含固相萃取法）時(shí)，通則0212規定的目標物限值對應的濃度是標線(xiàn)第3點(diǎn)（50μL）；使用QuEChERs方法時(shí)，通則0212規定的目標物限值對應的濃度是標線(xiàn)第4點(diǎn)（100μL）。

04 加標實(shí)驗如何開(kāi)展，需要的加標濃度是多少？

通則2341第五法中要求55個(gè)目標物的回收率在70%-120%，因此日常檢測實(shí)驗中需要開(kāi)展加標回收率實(shí)驗。加標實(shí)驗即在樣品粉碎稱(chēng)重后，向樣品粉末中加入適量的混合標準品溶液，混勻后按照供試品溶液的處理方法同時(shí)處理。

加標濃度建議按直接提取法（包含固相萃取法）和QuEChERs法進(jìn)行分類(lèi)：

直接提取法（包含固相萃取法）：

1、取0.5mL 20-200ppm的混標溶液，乙腈稀釋至10mL，得到1-10ppm的加標用混合標準使用溶液。

2、稱(chēng)取5.0g 樣品后，加入0.05mL 1-10ppm混標使用溶液（e.g. 水胺硫磷為5ppm），經(jīng)前處理后，供試品溶液的上機濃度5-50ppb（e.g. 水胺硫磷為25ppb）。

3、因為直接提取法結合固相萃取法的供試品溶液為2-5mL，所以1個(gè)樣品的供試品溶液可以分別供GC-MS/MS和LC-MS/MS的檢測需求。所以建議使用55種禁用農藥的混合標準品溶液，這樣可以減少一半的實(shí)驗量，提高工作效率。

QuEChERs：

1、取0.5mL 20-200ppm的混標溶液，乙腈稀釋至10mL，得到1-10ppm的加標用混合標準使用溶液。

2、稱(chēng)取3.0g 樣品后，加入0.03mL 1-10ppm混標使用溶液（e.g. 水胺硫磷為5ppm），經(jīng)前處理后，供試品溶液的上機濃度10-100ppb（e.g. 水胺硫磷為50ppb）。

3、因為QuEChERs方法的供試品溶液只有1mL，而GC-MS/MS需要加入0.3mL內標溶液，LC-MS/MS的檢測需要加入0.3mL純水，所以1個(gè)樣品的供試品溶液只能供一臺儀器的檢測需求。所以建議使用分組的混合標準品溶液，GC-MS/MS組35種禁用農藥混合標準品溶液、LC-MS/MS組31種禁用農藥混合標準品溶液。

以上加標方法僅為建議方法，各位老師也可以根據需求自行進(jìn)行調整。例如使用QuEChERs方法也可以使用55種的禁用農藥混標，只需要做兩組加標樣品，分別供GC-MS/MS和LC-MS/MS檢測即可。

05 11種重復的化合物有推薦的檢測方法嗎?

55種禁用農藥中同時(shí)可以使用GC-MS/MS和LC-MS/MS檢測的化合物有久xiao磷、殺chong脒、苯xian磷、蠅du磷、zhi螟磷、甲ban磷、甲基yi柳磷、內xi磷（O+S）、滅xian磷和水胺硫磷共11個(gè)目標物。

這11個(gè)目標物選擇檢測儀器的原則是目標物的響應和回收率，不同基質(zhì)可能選擇情況并不相同，主要是選擇一種響應較好，回收率符合要求的方法，兩種儀器只要選擇一種即可。

其中內xi磷（O+S）建議選擇LC-MS/MS檢測，因為內xi磷（O+S）在氣質(zhì)上出兩個(gè)峰，而在液質(zhì)上出一個(gè)峰，方便計算。

苯xian磷建議選擇LC-MS/MS檢測，因為氣質(zhì)質(zhì)只可檢測苯xian磷，而液質(zhì)質(zhì)可檢測苯xian磷、苯xian磷砜和苯xian磷亞砜三個(gè)目標物。

殺chong脒建議優(yōu)先選擇LC-MS/MS，因為GC-MS/MS檢測基質(zhì)干擾相對較多；水胺硫磷建議優(yōu)先選擇GC-MS/MS，因為L(cháng)C-MS/MS檢測基質(zhì)干擾相對較多。

以上選擇僅為建議方法，中藥基質(zhì)非常復雜，種類(lèi)繁多，各位老師終還是要根據基質(zhì)和前處理方法的實(shí)際情況進(jìn)行儀器的選擇。

以上是小編關(guān)于《中國藥典》2020版 通則2341第五法 33種禁用農藥檢測用標準品的一些問(wèn)題和建議，希望可以幫助各位老師和同仁更加清晰地了解標準，更加方便快速地開(kāi)展實(shí)驗。