干貨丨2分鐘帶您玩轉樣品前處理儀器-GPC

體積排阻色譜SEC在樣品前處理中，有著(zhù)*的作用，今天小編就帶您一起探尋一下GPC的原理，以及它在樣品前處理中的出色應用，一起來(lái)學(xué)習吧！

1.定義

體積排阻色譜法（Size exclusion chromatography，SEC）是利用多孔凝膠固定相的*特性，而產(chǎn)生的一種主要依據分子尺寸大小的差異來(lái)進(jìn)行分離的方法，它又稱(chēng)為空間排阻色譜法（Steric exclusion chromatography）。

2.分類(lèi)

流動(dòng)相：水；凝膠過(guò)濾色譜（GFC）

流動(dòng)相：有機相； 凝膠滲透色譜（GPC）

3.固定相

填料：多孔凝膠（軟性凝膠和剛性凝膠）；

特點(diǎn)1：表面分布大小不一的小孔（如圖）

特點(diǎn)2：凝膠顆粒間存在空隙

4.分離

特點(diǎn)1：

化合物按照分子量大小，分為小分子，中等分子、大分子。

小分子： 能通過(guò)小孔、中孔、大孔、空隙；

中等分子：能通過(guò)中孔、大孔、空隙；

大分子： 被排阻在外，只能通過(guò)填料空隙。

特點(diǎn)2：

分子量越小，越能通過(guò)更多不同的孔徑的孔，分子量越大，只能通過(guò)一些較大孔徑的孔，分子量足夠大*被排斥在外，而不能通過(guò)孔，只能通過(guò)填料間的空隙。

特點(diǎn)3：

能通過(guò)的孔越多，所走的距離越長(cháng)，出峰越慢；能通過(guò)的孔越少，所走的距離越短出峰越快。

5.原理

基于分配理論：

6.確定分子量大小

如同色譜質(zhì)譜的定量分析一樣，通過(guò)標準曲線(xiàn)法來(lái)定量未知樣品的分析物質(zhì)的濃度。在GPC中組分從柱中的洗脫體積（Ve）與分子量（M）存在對應關(guān)系lgM- Ve，我們可先通過(guò)配置好的已知分子量的化合物分子，進(jìn)樣后，在凝膠柱上存在對應的洗脫體積，來(lái)配制標準曲線(xiàn)，在相同色譜條件下，未知的物的分子量，可以通過(guò)其洗脫體積，在準曲線(xiàn)上找到對應的分子量。

A: 分子量為10⁶， 對應洗脫體積為V₀

B：分子量為10³ , 對應洗脫體積為V₀+V_P

X: 未知物，對應的洗脫體積為V_x， 可求得其分子量大小

7.兩個(gè)極限

極限一：排阻極限

如果要分離的物質(zhì)，分子量足夠大，比填料的大孔徑都大，所有分子都將被排斥。

極限二：滲透極限

如果要分離的物質(zhì)，分子量足夠小，比填料的小孔徑都小，所有分子都被滲透。

結論：體積排阻色譜只能分離凝膠柱處于滲透極限對應化合物分子量A和處于排阻極限對應化合物分子量B之間的物質(zhì)。

8.舉個(gè)例子（土壤中的多環(huán)芳烴的分離）

圖中的藍色為為土壤萃取物的紫外吸收曲線(xiàn)，可以發(fā)現，色譜峰型較寬，只出現一個(gè)混雜的色譜峰，如不處理，將難以進(jìn)行定量分析，黑色線(xiàn)為經(jīng)過(guò)SEC處理的土壤提取物，當得知多環(huán)芳烴流出的時(shí)間后（收集點(diǎn)），在其流出時(shí)間處收集（紅色部位），將收集物在反相液相色譜上分析，得到如下色譜圖：

經(jīng)過(guò)SEC處理的收集物（多環(huán)芳烴），在HPLC上 得到了好的分離，干擾性雜質(zhì)（玉米油、DEHP等）也得到了很好的去除效果。另外GPC得一個(gè)典型的應用，就是在農藥殘留分析中，去除油脂，大分子蛋白、色素。SEC提供了常規SPE和LLE難以分離處理的復雜基質(zhì)樣品的前處理手段。