干貨丨流速慢、回收率低、平行性差？SPE操作技巧幫你輕松解決

       為什么SPE操作中會(huì )出現流速很慢或流速不一致、回收率低、平行性差的情況呢？這些問(wèn)題可能很多小伙伴都遇到過(guò)。是小柱選擇不合適，方法有問(wèn)題嗎？還是填料粒徑分布不均一，裝填松緊程度不穩定？其實(shí)SPE小柱每個(gè)批次的流速都有嚴格的質(zhì)控范圍，質(zhì)控范圍內的小柱能夠保證流速的穩定性，質(zhì)控范圍之外的小柱會(huì )被作為異常品處理。那是不是采用穩定的方法，使用經(jīng)出廠(chǎng)流速檢測合格的小柱就能*避免這些問(wèn)題呢？

       其實(shí)還有一個(gè)非常容易被大家忽略的細節也會(huì )導致流速過(guò)慢：SPE小柱在運輸過(guò)程中篩板和填料可能會(huì )出現微小的松動(dòng)，導致空氣進(jìn)入填料（一般不容易被肉眼發(fā)現），含有空氣的填料在氣壓的作用下導致溶劑流下速度很慢。說(shuō)到這里大家就能夠理解為什么同一批小柱會(huì )出現流速參差不齊的情況了。那我們在SPE實(shí)驗操作中如何解決這個(gè)問(wèn)題呢？

一  排氣泡

1.1 排氣泡的方法

√ 正壓排除氣泡

       樣品數量比較少，填料量比較少，人工施加正壓比較方便的情況下，可以使用注射器連接轉接頭的方式進(jìn)行正壓排除氣泡。

√ 負壓排除氣泡

       樣品數量比較大，填料量較多，人工施加正壓不方便的情況下，可以使用真空泵連接固相萃取裝置的方法，負壓排除氣泡。

1.2 何時(shí)排氣泡？

       SPE操作中，一般包含活化平衡、上樣、淋洗、洗脫四個(gè)步驟。是每一步都需要排氣泡嗎？當然不是，一般在填料之間有空隙的情況下需要進(jìn)行排氣泡的操作，比如加入活化平衡溶液之后，就需要進(jìn)行排氣泡的操作，使得溶液能夠更好的與填料接觸。

       還有一個(gè)容易被忽視的環(huán)節也是需要排氣泡的，一般淋洗后需要進(jìn)行抽干操作，抽干后填料間也會(huì )有空氣進(jìn)入，加入洗脫液后，也是需要進(jìn)行排氣泡操作的，否則大量的氣泡也會(huì )嚴重影響洗脫液的流速以及洗脫效果。

1.3 排氣泡的注意事項

       排氣泡時(shí)，一般排除1/3柱管體積的溶劑即可排除填料中的氣泡，切記不可以將溶液排干。防止排干，手動(dòng)排氣泡的速度不易過(guò)快，但也不能過(guò)慢，過(guò)緩的速度可能會(huì )排不出較大的氣泡。

       如果活化平衡溶液一不小心排干了怎么辦？只要重新加入活化溶劑進(jìn)行排氣泡就可以了。

       正確的排除氣泡就可以在一定程度上避免流速過(guò)慢或流速不一致的情況了。那我們的回收率、平行性就能得到保證嗎？還有一個(gè)神奇的小操作——抽干，同時(shí)做好這兩步，才能讓我們得到一個(gè)更好的實(shí)驗結果。

二  抽干

 何時(shí)抽干？

× 活化平衡溶液、上樣液不需要抽干

       活化平衡過(guò)程的主要目的有兩個(gè)，一是清洗填料，洗去填料中本底，二是便于鍵合相分子的展開(kāi)。主要是一些長(cháng)鏈的官能團，例如C18在填料是干的情況下不是*展開(kāi)的狀態(tài)，活化可以使填料官能團濕潤和舒展，使之保持對目標化合物的大吸附活性。

       所以活化平衡過(guò)程是不需要進(jìn)行抽干的。

       有小伙伴曾經(jīng)問(wèn)到上樣液是否需要抽干操作？上樣液與淋洗液的極性一般是比較相似的，所以上樣液也是不需要進(jìn)行抽干的。

√ 淋洗液、洗脫液需要抽干

       淋洗液需要抽干的原因主要有兩個(gè)：

       ①一般淋洗液與洗脫液的極性相差會(huì )較大（如淋洗液是水，洗脫溶劑為正己烷或二氯甲烷），兩種溶劑不互溶或溶解性較差，這會(huì )導致洗脫液流不下來(lái)或流速較慢，阻礙洗脫溶劑與目標物的接觸，洗脫效果差，回收率低。

       ②淋洗液如果是水的話(huà)，不進(jìn)行抽干，會(huì )有部分被收集到洗脫液中，洗脫液如果進(jìn)行氮吹的話(huà)，含水的洗脫液也是很難進(jìn)行吹干的，如果進(jìn)行長(cháng)時(shí)間的氮吹將少量的水溶液吹干的話(huà)會(huì )導致回收率偏低的情況出現，所以淋洗之后是需要進(jìn)行抽干操作的。

       洗脫之后會(huì )有部分洗脫溶劑殘留在填料上，填料量較多的時(shí)候，甚至會(huì )殘留1~2mL的洗脫液，無(wú)法*回收洗脫液，導致回收率低，平行性差。為了保證洗脫溶劑與目標物*被回收也是需要進(jìn)行抽干的。

總結

√ 活化平衡、洗脫前進(jìn)行排氣泡。

√ 淋洗、洗脫后進(jìn)行抽干。