2020版《中國藥典》真菌毒素八大熱點(diǎn)問(wèn)題深度解答

更新時(shí)間：2020-10-22 點(diǎn)擊次數：1358

中藥材從種植、生產(chǎn)、流通的全過(guò)程周期較長(cháng)，控制不當易受真菌毒素危害，再加上真菌毒素的產(chǎn)生與宿主基質(zhì)特性密切相關(guān)，不同類(lèi)型中藥材會(huì )產(chǎn)生種類(lèi)和性質(zhì)各異的真菌毒素，方位加強中藥材中真菌毒素污染水平監控成為《中國藥典》2020版的重中之重。

2020版《中國藥典》6月正式發(fā)布，自該標準發(fā)布以來(lái)，中藥分析檢測工作者面臨了一系列的挑戰。為了宣貫2020年《中國藥典》的變化，上海安譜實(shí)驗科技股份有限公司開(kāi)展“2020年中國藥典標準解讀以及中藥檢測分析技術(shù)”專(zhuān)題培訓班。針對此次培訓，今天小編整理了老師們關(guān)注有關(guān)真菌毒素檢測的八大熱點(diǎn)問(wèn)題。

Q:黃曲mei素檢測有哪些注意事項？怎么樣才能使測試結果更加準確可靠？

A:在測試黃曲mei素的時(shí)候需要注意如下幾點(diǎn)，這樣能保證測試的準確性。

（1）取樣一定要均勻，對于性質(zhì)特殊的供試品，可適當調整取樣量，像地龍比較粘稠的可以適當調整取樣量，不過(guò)一般應不低于5g；

（2）正確的測試免疫親和柱，可測柱回收率，考察免疫親和柱的性能；

（3）采用第yi法液相色譜法測定結果超出限度時(shí)，應采用第二法液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行確認；

（4）進(jìn)行真菌毒素檢測時(shí)，實(shí)驗室應有相應的安全防護措施，不得污染環(huán)境；黃曲霉du素的毒性很強，需要采取必要的安全措施。建議設用單獨的實(shí)驗室和實(shí)驗器材，不與別的實(shí)驗一起混用；

（5）殘留有黃曲霉du素的廢液或者廢渣的玻璃器皿，應置于儲存容器（裝有10%次氯酸奶溶液）內，浸泡24h以上，再用清水將玻璃器皿清洗干凈。

Q:真菌毒素實(shí)驗的過(guò)程中使用的對照品有什么要求？

A:（1）對照物質(zhì)應能夠溯源量值，shou選使用法定標準物質(zhì)；

（2）很多品種為劇du品，使用時(shí)應加強安全防護；

（3）一般情況下不推薦使用固體純品，已知濃度的標準物質(zhì)溶液（或混合溶液）在痕量分析中使用更為方便，也更為廣泛；

（4）針對很多劇毒成分，如黃曲霉du素，使用標準物質(zhì)溶液也能夠有效減少對檢驗人員的安全風(fēng)險。通常，首先配置成1-100ug/ml的濃溶液，作為儲備液使用。儲備液可保存在惰性，密封，避光，低溫環(huán)境下。儲備液的濃度，溶劑，配制日期應詳細記錄，并在原始記錄中明確顯示，以便于溯源。儲備液的有效期應根據穩定性測試數據確定。

Q:中藥中痕量殘留量檢測分析中空白實(shí)驗怎么防止污染與干擾？

A:防止污染與干擾是痕量分析質(zhì)量控制的重要內容：

（1）避免交叉污染：樣品儲存需要采用通過(guò)密封或者分開(kāi)放置等方式防止樣品之間，防止樣品之間，樣品與潛在污染源之間的互相污染；實(shí)驗室器皿建議，檢測所使用的器皿應有針對性的仔細清洗，尤其需要避免標準物質(zhì)，高濃度陽(yáng)性樣品與普通樣品間的交叉污染。實(shí)驗試劑應選擇適宜純度，并通過(guò)使用瓶口分液器等方式減少試劑瓶多次開(kāi)啟造成的試劑被污染。

（2）日常質(zhì)控要求：每次檢測均應隨行空白實(shí)驗，即不取樣，*按照供試品溶液制備程序操作并測定，以便反應試劑，器皿，環(huán)境對測定的干擾情況。當空白實(shí)驗干擾峰峰面積（響應值）不高于較準曲線(xiàn)濃度低點(diǎn)峰面積（響應值）的1/2時(shí)，可認為無(wú)干擾。在試驗操作過(guò)程中，通常按照空白實(shí)驗，樣品測定，回收試驗的順序操作，嚴格避免交叉污染。

Q:使用免疫親和柱的注意事項有哪些？樣品的PH在什么范圍時(shí)柱效是hao的？

A:在過(guò)免疫親和柱之前如果溶液不夠澄清的話(huà)，需要用離心或者玻璃濾紙過(guò)濾的方法使溶液澄清后再過(guò)免疫親和柱。建議使用前仔細閱讀使用的注意事項比如可冷藏不能冷凍，注意使用親和柱（shi合的PH值6-8）的時(shí)候先測一下樣品的PH值，是中性的話(huà)柱效果是hao的。在進(jìn)行回收率考察的時(shí)候先進(jìn)行柱回收率的考察，把適當的黃曲mei素的混合標準溶液先通過(guò)免疫親和柱后進(jìn)行測試，考察一下免疫親和柱的性能，再考察整體的回收率。

Q:檢測限的確定需要做什么工作?準確度和精密度嗎？檢測限的概念是應該是定量限嗎？

A:檢測限（報告限）是指殘留量被作為數值報告的低濃度。檢測限一般等于或略高于低較準濃度，具有可接受的準確度和精密度，是高于實(shí)際方法定量限的一個(gè)固定數值。

當MPL（大殘留量）≥0.1mg/kg時(shí)，檢測限應<1/10MRL；當MPL<0.1mg/kg時(shí)，檢測限應≤1/3MRL。由于檢測限的設定，檢驗人員不必每一次進(jìn)行樣品分析時(shí)都嚴格進(jìn)行LOQ測定，可以節省很多人力物力；同一體系內部的各實(shí)驗室間針對同一方法也可以設定一致的檢測限，這樣一來(lái)出具的報告具有了可比性，也便于統計分析，發(fā)布結果。

Q:黃曲mei毒素方法驗證中檢出限怎么做？

A:關(guān)于檢出限的概念容易混淆，檢出限有儀器檢出限和方法檢出限兩種。儀器檢出限僅僅反應的是檢測系統的響應，通常把標準品稀釋用3倍的信噪比的進(jìn)樣量來(lái)表示。方法的檢出限應該是在空白基質(zhì)中定量的加入對照品，后按照供試品的提取方法進(jìn)行提取，然后進(jìn)行檢測分析，獲得1/10的信噪比。對應的加入的對照品的濃度就是方法的檢出限。在20版在做黃曲霉mei毒素的測定實(shí)驗時(shí)，建議做儀器的檢出限，然后再折算成樣品的檢出限。

Q:不同基質(zhì)的中藥材中真菌毒素的檢測有什么不同？會(huì )因為基質(zhì)不同而出現結果的差異嗎？

A:基質(zhì)效應的影響因子是根據基質(zhì)效應因子進(jìn)行判斷的，基質(zhì)效應是指在對分析物的濃度或質(zhì)量測定過(guò)程中，來(lái)自樣品中其它化合物的一種或者幾種綜合的影響?；|(zhì)因子是指空白樣品溶液加標測定值與純溶劑配制同樣濃度標準品溶液測定值的比值。機制效應的評定采用的機制因子進(jìn)行評定的。不同品種，不同成分，基質(zhì)影響不同，有普遍偏低現象。如果機制效應因子在85%-115%之間說(shuō)明機制效應在不同的方法不存在顯著(zhù)差異，不同的品種不同的材質(zhì)機制效應是不同的。按照通則去做，不同基質(zhì)在液質(zhì)上會(huì )有基質(zhì)干擾，這個(gè)干擾的大小會(huì )因為基質(zhì)不同而不同，實(shí)驗過(guò)程中需要針對不同基質(zhì)做一些方法上的改進(jìn)。例如地龍按藥典沒(méi)辦法提取，需要進(jìn)行一些實(shí)驗的優(yōu)化和調整的。

Q:怎么做一條好的校準曲線(xiàn)？

A:校正曲線(xiàn)是用于描述待測物質(zhì)的濃度或量與相應的測量?jì)x器的響應量或其他指示量之間的定量關(guān)系的曲線(xiàn)。校準曲線(xiàn)的制定需要滿(mǎn)足以下條件：線(xiàn)性范圍在檢測器jia響應范圍內；一般要求，低校準濃度（CL）所對應的樣品中待測物濃度應≤1/10MRL（當MRL≥0.1mg/kg時(shí)），或≤1/3MRL（MRL<0.1mg/kg時(shí)）。大殘留*（MRL）所對應的供試品速溶濃度應在校準曲線(xiàn)的中間或偏上濃度位置；gao校準濃度可根據樣品中待測物的可能殘留量及儀器的線(xiàn)性檢測能力設置為MRL的2-10倍；線(xiàn)性范圍一般無(wú)需強制通過(guò)原點(diǎn)，校準曲線(xiàn)相關(guān)系數一般不低于0.990；當線(xiàn)性范圍超過(guò)1個(gè)數量級時(shí)，可使用分段校準或采用加權校準的方式，測量誤差小于簡(jiǎn)單的線(xiàn)性校準；完成樣品測定或每完成一定批次樣品分析后，應再次分析校準曲線(xiàn)中的代表性濃度標準溶液（如MRL對應的濃度點(diǎn)），響應值和校準曲線(xiàn)偏差應在±15%以?xún)取?/p>