干貨丨合成著(zhù)色劑分析之靛藍分析回收率不穩定？安譜實(shí)驗帶你揭秘真相！

食用色素，是色素的一種，即能被人適量食用的可使食物在一定程度上改變原有顏色的食品添加劑，又稱(chēng)食用染料和著(zhù)色劑，分為天然和人工合成兩種，合成著(zhù)色劑因色澤鮮艷，著(zhù)色力強、穩定性好、價(jià)格低廉等特點(diǎn)而被廣泛使用。靛藍是食品生產(chǎn)中常用的合成著(zhù)色劑之一，關(guān)于靛藍的分析測試，有實(shí)驗員反饋回收率做不好，時(shí)高時(shí)低，事實(shí)真是這樣嗎，我們一起來(lái)揭秘真相！

本文所指的靛藍，CAS：860-22-0。因許多著(zhù)色劑中文俗稱(chēng)一樣，在選擇標準品的時(shí)候容易弄錯，比如CAS：860-22-0與CAS：482-89-3的著(zhù)色劑，生活中習慣均稱(chēng)之為靛藍，但兩者結構式是不一樣的，CAS：860-22-0的靛藍可以溶于水，而CAS：482-89-3的靛藍不溶于水。

CAS：860-22-0

CAS：482-89-3

實(shí)驗部分

SPE

小柱：聚酰胺小柱500mg/6mL

活化：5mL甲醇

平衡：5mL 水

上樣：5mL 1ppm靛藍標準品，溶劑檸檬酸溶液（pH 3.0~4.0）

淋洗：5mL 甲醇：甲酸：去離子水（4：2：4）（V/V/V），淋洗后抽干小柱中的溶液。

洗脫：3mL*2 10%氨水甲醇

收集洗脫液，并于50℃氮吹至干，用甲醇：0.02M乙酸銨溶液（1:1）定容至1mL，充分溶解后，上機分析。

儀器條件

色譜柱： C18-Wp（4.6mm*250mm，5um）

流動(dòng)相：A:甲醇  B：乙酸銨(0.02mol/L)

梯度洗脫：0min 15%A，5min 35% A，12~22min 95%A，22.5~30min 15 %A

流速：1.0mL/min

柱溫：25℃

波長(cháng)：254nm

進(jìn)樣量：10uL

實(shí)驗結果

靛藍的加標回收率在60~100%，不同實(shí)驗時(shí)間、不同實(shí)驗員測試的結果不盡相同。

原因分析

那么到底是什么原因導致靛藍回收率不穩定呢，我們從以下方面進(jìn)行了分析。

1 SPE方法

分布收集SPE上樣、淋洗溶液均未檢測到靛藍，對洗脫后的聚酰胺小柱做第二次洗脫，也未檢測到目標物；

降低SPE小柱上樣溶液的濃度至原來(lái)的1/5,并重復分布收集過(guò)程，洗脫液中靛藍的回收率依然不穩定，忽高忽低；

換用不同材質(zhì)的容器，塑料容器和玻璃容器收集過(guò)柱溶液，排查盛放過(guò)柱溶液的容器是否吸附靛藍，結果并無(wú)差異。

經(jīng)過(guò)對SPE方法的分析，回收率有時(shí)候可以達到90%以上，可見(jiàn)SPE方法沒(méi)有問(wèn)題。

2 標準品存放條件

配置500ppm/水的靛藍標準儲備溶液，室溫存放一段時(shí)間，肉眼觀(guān)察其變化情況?？梢?jiàn)剛配置好溶液為藍色，然后顏色不斷變化，放置三周后溶液變成黃色并一直保持這個(gè)顏色，可見(jiàn)靛藍水溶液在室溫存放穩定性不好，分析導致其變質(zhì)的原因可能有溫度、時(shí)間、光照、氧氣等因素。

圖1  500ppm靛藍水溶液

將500ppm/水的靛藍標準儲備溶液配置后4℃保存，在不同的時(shí)間取樣，加水溶解稀釋成5ppm的溶液后，立即上機測試，并與新紅、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍、赤蘚紅B其他7種著(zhù)色劑做對照，7種著(zhù)色劑的處理方法與靛藍相同。8種著(zhù)色劑峰面積測試結果見(jiàn)表1。由此可見(jiàn)，除了靛藍之外，其他7種著(zhù)色劑在相同的保存條件下含量均無(wú)變化，而靛藍儲備溶液4℃保存時(shí)，隨著(zhù)保存時(shí)間的延長(cháng)，會(huì )不斷降解，一個(gè)月后有效成分只有初的66%。即使是同時(shí)配置的靛藍溶液，光照4h后，有效成分也只有初的83%，光照11h后，有效成分只有初的63%。

實(shí)驗方法改進(jìn)

每次實(shí)驗均取固體靛藍標品，現用現配，在整個(gè)實(shí)驗過(guò)程中避光操作，實(shí)驗前處理時(shí)間控制在1天之內，樣品處理完后，立即上機測試，結果靛藍的回收率可以達到90~95%，RSD<5%。

小編建議

靛藍（CAS:860-22-0）性質(zhì)很不穩定，不耐光和熱，實(shí)驗中靛藍回收率忽高忽低不穩定的原因主要是靛藍標準品發(fā)生了降解或者樣品中的靛藍在前處理過(guò)程中降解，為了避免靛藍的損失，每次實(shí)驗需要用固體的靛藍標品，現用現配，實(shí)驗用到的標品包括上機的和加標的，需要同時(shí)配置好并在相同的條件下保存，在整個(gè)實(shí)驗過(guò)程中避光操作，合理安排前處理時(shí)間，盡可能快的完成前處理，樣品處理完后，立即上機測試。