干貨丨合成著(zhù)色劑分析之亮藍分析有雜峰干擾？安譜實(shí)驗帶你揭秘真相！

     食用色素，是色素的一種，即能被人適量食用的可使食物在一定程度上改變原有顏色的食品添加劑，又稱(chēng)食用染料和著(zhù)色劑，分為天然和人工合成兩種，合成著(zhù)色劑因色澤鮮艷，著(zhù)色力強、穩定性好、價(jià)格低廉等特點(diǎn)而被廣泛使用。

     chang用的食品添加有新紅、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍 、赤蘚紅等，《GB 5009.35-2016 食品安全國家標準 食品中合成著(zhù)色劑的測定》中規定了這7種合成著(zhù)色劑的液相分析方法，7種合成著(zhù)色劑中其中一種著(zhù)色劑是亮藍，關(guān)于亮藍的測定經(jīng)常聽(tīng)實(shí)驗員反饋亮藍旁邊總是有雜質(zhì)峰，事實(shí)真是這樣嗎？

我們一起來(lái)揭秘真相！

上機標品

準備亮藍標品， 用水配置成10ppm。

儀器條件

色譜柱： C18-Wp（4.6mm*250mm，5um）

流動(dòng)相：A:甲醇B：0.02M乙酸銨

梯度洗脫：0min 20%A，5min 35% A，12~18min 98%A，20~27min 20%A

柱溫：25℃

波長(cháng)：254nm

進(jìn)樣量：20ul

流速：1.0ml/min

實(shí)驗譜圖

圖1亮藍色譜圖（色譜條件1）

圖4 亮藍色譜圖（色譜條件2）

圖5 亮藍色譜圖（色譜條件3）

結果分析

扣除溶劑空白后得到的亮藍譜圖見(jiàn)圖1，果然不是對稱(chēng)的色譜峰，而且非但不對稱(chēng)，看著(zhù)還像3個(gè)峰。那么到底是什么原因呢，我們從以下方面進(jìn)行了分析。

（1）標準品問(wèn)題。若標準品純度不高，可能會(huì )帶來(lái)雜質(zhì)干擾，查看亮藍標準品的證書(shū)標識的純度是87.6%，純度不是特別高，但是是某進(jìn)口D公司生產(chǎn)的，無(wú)法確定3個(gè)峰里面是否含有雜質(zhì)峰。

（2）光譜特征。紫外-可見(jiàn)吸收光譜是化合物固有的性質(zhì)，一般不同的化合物其吸收特征是不一樣的，因此可以通過(guò)光譜特征對化合物進(jìn)行定性分析。那么這3個(gè)峰到低是什么物質(zhì)呢，使用DAD檢測器對其進(jìn)行200-800nm范圍內的掃描，得到的光譜見(jiàn)圖2，由此可見(jiàn)3個(gè)化合物的紫外吸收特征非常相似，在HPLC-UV分析中這種情況一般都是同分異構體。

圖2 亮藍光譜掃描圖

（3）結構特征。那么亮藍真的有同分異構體嗎，亮藍的結構式見(jiàn)圖3，為非偶氮類(lèi)酸性染料，主要有3個(gè)同分異構體，自然界中常以 3 種同分異構體的混合物(間位磺化物:對位磺化物:鄰位磺化物＝75～85: 15～20:0～8)形式存在，因而液相分析的時(shí)候常常得不到單一對稱(chēng)的色譜峰。

圖3 亮藍結構式

（4）定量分析。那么如何對亮藍的含量進(jìn)行定量分析是實(shí)驗員比較關(guān)心的問(wèn)題，液相色譜定量分析的前提是先分離，嘗試對流動(dòng)相比例進(jìn)行調節，以減緩洗脫能力，我們發(fā)現這3個(gè)峰是可以實(shí)現基線(xiàn)分離的，比如圖4，圖5，不同色譜條件、不同濃度時(shí)各色譜峰面積結果以信息見(jiàn)表1。

表1 亮藍色譜峰面積

由此可以看出，不同的色譜條件，相同濃度的亮藍3個(gè)色譜峰基線(xiàn)分離和未分離時(shí)峰面積存在一定的差異，但是相同的色譜條件下，在2-100ppm的濃度范圍，各個(gè)亮藍的同分異構體峰面積-濃度的線(xiàn)性關(guān)系較好，可能在不同的色譜條件下，亮藍的響應情況會(huì )有稍微的差異，而在特定的色譜條件下，亮藍各個(gè)組分的同分異構體并不會(huì )發(fā)生很大的轉變。

實(shí)驗結論

（1）亮藍分析時(shí)出現的疑似雜質(zhì)峰其實(shí)是亮藍的同分異構體，亮藍有3種同分異構體。

（2）實(shí)際應用中可以根據自己的實(shí)驗目的，決定是否要使3個(gè)同分異構體*分離，如果測試的是總的亮藍含量，把3個(gè)目標峰合并在一起計算，如果是計算各個(gè)異構體的含量就要通過(guò)調節色譜條件使其*分離后再定量計算。