薄層色譜TLC的操作有這幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)

 

　　薄層色譜TLC的操作有這幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)：

　　1、點(diǎn)樣

　　盡量用小的點(diǎn)樣管。如果有足夠的耐性，應該只用1微升的點(diǎn)樣管。這樣，點(diǎn)的斑點(diǎn)較小，展開(kāi)的色譜圖分離度好，顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點(diǎn)樣斑點(diǎn)擴散大。樣品溶液的溶劑一般是無(wú)水乙醇、甲醇、乙酸乙酯。點(diǎn)好樣的薄層板用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或放入干燥器里晾干。

 

　　2、鋪板

　　鋪板用的勻漿不宜過(guò)稠或過(guò)?。哼^(guò)稠，板容易出現拖動(dòng)或停頓造成的層紋；過(guò)稀，水蒸發(fā)后，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1：2～3，硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時(shí)間，根據經(jīng)驗來(lái)定，與空氣濕度有關(guān)，一般通過(guò)拿起研棒時(shí)勻漿下滴的情況來(lái)判斷，越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板涂層的厚度，進(jìn)一步影響上樣量。涂層薄，點(diǎn)樣易過(guò)載；涂層厚，顯色不那么明顯。通常，板的質(zhì)量對薄層鑒別的影響不是很大，影響較大的是展開(kāi)劑的配制和展開(kāi)系統的飽和。

 

　　3、展開(kāi)劑配制

　　選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗，強烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大的一層作為展開(kāi)劑。不應該把各組成溶液倒入展開(kāi)缸，振搖展開(kāi)缸來(lái)配制展開(kāi)劑?；旌喜痪鶆蚝蜎](méi)有分液的展開(kāi)劑，會(huì )造成層析的*失敗。各組成溶劑的比例準確度對不同的分析任務(wù)有不同的要求，盡量達到實(shí)驗室儀器的較高準確度，比如：取1ml的溶劑，應使用1ml的單標移液管，移液管應符合計量認證要求，盡管多數時(shí)候這不是須的。

 

　　4、溫濕度的控制

　　溫濕度對薄層影響都很大。不凍結的前提下，通常溫度越低分離越好，較難的分離需在低溫下分離，例如人參皂苷。濕度的影響，估計主要是影響薄層板的吸附能力，導致選擇性（容量因子）的變化，濕度應根據實(shí)際情況確定。溫度控制使用空調器或冰柜，濕度控制是通過(guò)在另一展開(kāi)槽放置相應濃度的硫酸。

 

　　5、展開(kāi)系統的飽和

　　一般使用的是雙槽的展開(kāi)缸，一槽用來(lái)放展開(kāi)劑，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展開(kāi)的板放入兩槽間的平臺，斜架著(zhù)，蓋上展開(kāi)缸的蓋子。讓展開(kāi)劑的蒸氣充滿(mǎn)展開(kāi)缸，并使薄層板吸附蒸氣達到飽和，防止邊沿效應，飽和時(shí)間在半個(gè)小時(shí)左右。展開(kāi)時(shí)難免要打開(kāi)蓋子把薄層板放入展開(kāi)劑中，不過(guò)對薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當然動(dòng)作應該盡量輕、快。