水中總氮空白值居高不下怎么辦？

     總氮（TN）是衡量水質(zhì)的一個(gè)重要指標之一。其測定有助于評價(jià)水體被污染和自?xún)魻顩r。地表水中氮、磷物質(zhì)超標時(shí)，微生物大量繁殖，浮游生物生長(cháng)旺盛，出現富營(yíng)養化狀態(tài)?？偟亩x是水中各種形態(tài)無(wú)機和有機氮的總量。包括NO3-、NO2-和NH4+等無(wú)機氮和蛋白質(zhì)、氨基酸和有機胺等有機氮，以每升水含氮毫克數計算。常被用來(lái)表示水體受營(yíng)養物質(zhì)污染的程度。

     水質(zhì)總氮的測定方法主要有堿性過(guò)硫酸鉀紫外分光光度法（HJ 636-2012），氣相分子吸收光譜法，氨氮、硝酸根分別測定方法等，而堿性過(guò)硫酸鉀紫外分光光度法在環(huán)境地表水、水質(zhì)檢測領(lǐng)域應用廣泛。

     在使用過(guò)硫酸鉀消解測試總氮的時(shí)候，不知道小伙伴們有沒(méi)有為空白值不穩定而苦惱？

     HJ 636-2012中規定了每批樣品應至少做一個(gè)空白實(shí)驗，且要求空白試樣的校正吸光度應小于0.030。有些小伙伴有時(shí)會(huì )忽略0.030的要求，當空白值大于0.030時(shí)，則直接用測試值減去空白值進(jìn)行計算，這樣的方法，對低氮含量的測試的準確性影響是非常大的。

說(shuō)到校正吸光度，我們先來(lái)看一下校正吸光度的公式：

     堿性過(guò)硫酸鉀消解紫外分光光度法測定總氮的原理是：利用過(guò)硫酸鉀的氧化性，將水樣中的氨氮、亞硝酸鹽氮及大部分有機氮化合物氧化為硝酸鹽。硝酸根離子在220nm波長(cháng)處有吸收，而溶解的有機物在此波長(cháng)下也有吸收；在275nm波長(cháng)處，有機物有吸收而硝酸根離子沒(méi)有吸收，所以利用兩個(gè)波長(cháng)下的吸光度對硝酸鹽氮值進(jìn)行校正，公式中2倍為溶解在水中有機物在220nm和275nm處吸光度的經(jīng)驗系數。

     那么，具體有哪些因素會(huì )影響到空白吸光度呢？通過(guò)大量客戶(hù)實(shí)驗中的“慘痛教訓”，我們?yōu)榇蠹铱偨Y了過(guò)硫酸鉀空白值不穩定的幾點(diǎn)原因：

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所用試劑

     部分過(guò)硫酸鉀合成過(guò)程以硫酸銨為原料，這也是導致空白值高于0.030的一個(gè)原因，因此，需使用符合國標要求的試劑，即總氮小于0.0005%的過(guò)硫酸鉀和氫氧化鈉。市售過(guò)硫酸鉀質(zhì)量參差不齊，很多過(guò)硫酸鉀只標注了純度，而沒(méi)有總氮指標。我們對同一品牌過(guò)硫酸鉀的不同批次，以HJ 636-2012附錄A中的方法測試挑選了含量為0.001%和0.0005%的過(guò)硫酸鉀，并配制成堿性過(guò)硫酸鉀溶液進(jìn)行空白測試：

     結果表明，雖然兩種過(guò)硫酸鉀空白值相差不大，但總氮含量越低，空白值也相應降低。同時(shí)由于總氮測試方法不同，由不同方法得到的過(guò)硫酸鉀總氮值略有差異，建議在實(shí)驗前先以HJ 636-2012中條件做空白實(shí)驗，以驗證過(guò)硫酸鉀是否符合要求。

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消解時(shí)間

     HJ 636-2012中規定了消解時(shí)間為30min，自然冷卻并開(kāi)閥放氣，將比色管冷卻至室溫再進(jìn)行后續操作。經(jīng)實(shí)驗測試，過(guò)硫酸鉀和氫氧化鈉本身在220nm處也有較強的吸收，自然冷卻可以讓高壓滅菌器中溫度在一段時(shí)間內繼續保持在一個(gè)相對較高的水平，以此保證過(guò)硫酸鉀*反應，否則殘留的過(guò)硫酸鉀便會(huì )對空白值產(chǎn)生影響。而我們在實(shí)驗中，可以適當將消解時(shí)間延長(cháng)至40min，以保證過(guò)硫酸鉀*反應。下表中列出不同消解時(shí)間，空白吸光度的數值：

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其他因素

     HJ 636-2012中使用的玻璃器皿也會(huì )對總氮測試空白值產(chǎn)生影響，當空白比色管在有氨污染的環(huán)境下存放一段時(shí)間，空白吸光度也會(huì )受到影響。建議每次使用完畢后，用1+9的硫酸溶液浸泡比色管（消解氮含量高的樣品后，可使用1+3硫酸溶液浸泡），并用無(wú)氨水沖洗干凈再使用。

     高壓滅菌器在工作中為*密閉狀態(tài)，但其中的水分會(huì )在高壓下蒸發(fā)，因此其清潔程度也會(huì )對空白值造成影響，經(jīng)常消解高氮源的實(shí)驗室，需定時(shí)清洗高壓滅菌器并換水，以保證每批次處理的試樣的準確性不受干擾。

*[1]百度百科，總氮

  [2]潘小敏，馬建騰，陳潔.吸光度計算公式A=A220-2A275對結果影響及使用范圍的探討[J].輕工科技, 2013, 5(5).

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