實(shí)驗小技巧丨教您幾招，治療SPE小柱“便秘”難題！

     今天是2019年的第yi個(gè)周一，從今天開(kāi)始，安譜實(shí)驗微xin公眾號將在每周一（法定節假日除外）準時(shí)發(fā)布一條干貨，力爭從用戶(hù)視角出發(fā)，用更多更全面的專(zhuān)業(yè)內容，為廣大實(shí)驗室科研人員搭建一個(gè)實(shí)用、專(zhuān)業(yè)的學(xué)習平臺，歡迎大家持續關(guān)注！

     好了，現在就開(kāi)始今天的干貨放送吧！

小柱“便秘”怎么辦？

     在進(jìn)入主題之前，先簡(jiǎn)單介紹下固相萃?。⊿PE）技術(shù)。

     固相萃?。⊿olid Phase Extraction，簡(jiǎn)稱(chēng) SPE）技術(shù)，發(fā)展于上世紀 70 年代，由于其具有高效、可靠、消耗試劑少等優(yōu)點(diǎn)，在許多領(lǐng)域取代了傳統的液－液萃取而成為樣品前處理的有效手段， 在實(shí)驗室中得到了越來(lái)越廣泛的應用。它利用分析物在不同填料中被吸附的能力差將目標物提純，有效地將目標物與干擾物分離，大大增強對分析物，特別是痕量分析物的檢出能力，提高了被測樣品的回收率。

     萬(wàn)千世界的奇妙，造就了樣品基質(zhì)的千差萬(wàn)別，蔬菜，水果，肉蛋奶，水，土壤， 橡膠，紡織品等等，不管是食品還是環(huán)境的樣品，復雜程度也是各不相同。復雜程度一般的樣品可以用簡(jiǎn)單提取作為前處理方法，但是對于特別復雜的樣品就需要經(jīng)過(guò)特殊的前處理，比如用SPE 小柱，做進(jìn)一步的凈化，把目標物和雜質(zhì)分離，進(jìn)而在色譜儀器上得到一個(gè)漂亮色譜圖，大家看現行的一些標準就會(huì )發(fā)現，有些樣品基質(zhì)的前處理肯定是會(huì )用到 SPE 手段的。

     在用到 SPE 前處理的時(shí)候，各位分析檢測工程師碰到煩人令人抓狂的問(wèn)題是不是流速慢、流速不均、堵、下不去的情況；過(guò)小柱過(guò)到令人崩潰，既然流速都保證不了，怎么敢奢求回收率。

     沒(méi)關(guān)系，安譜實(shí)驗憑借多年來(lái)在樣品前處理領(lǐng)域的深厚積累，教您幾招，治liao小柱“便秘”的難題。

     SPE 的基本操作，包括活化、平衡、上樣、淋洗、洗脫，五個(gè)步驟。問(wèn)題無(wú)外乎出現在這幾個(gè)步驟里面，別急，我們一個(gè)個(gè)過(guò)來(lái)看。

活化平衡

     一般反相或者離子交換類(lèi)型的小柱分別用到甲醇和水進(jìn)行活化和平衡，正相小柱會(huì )用到石油醚或者正己烷來(lái)活化平衡。

1) 填料裝填過(guò)緊導致流速過(guò)慢。 可以通過(guò)加壓加快流速，或者購買(mǎi)對流速有嚴格質(zhì)控廠(chǎng)家的產(chǎn)品解決，安譜實(shí)驗對 CNW 小柱每個(gè)批次的流速都有嚴格的質(zhì)控范圍，質(zhì)控范圍之外的小柱會(huì )被剔除。

2) 填料粒徑過(guò)小導致流速變慢。 比如同樣的活化溶劑下，100-200 目的 florisil 就會(huì )比60-100 目的更慢些。 可以根據樣品基質(zhì)類(lèi)型和使用習慣選擇合適規格的小柱。

3) 柱管體積差異。 500mg 3mL； 500mg 6mL， 這兩種規格形成的填料高度不一樣，顯然 500mg 6mL，直徑大，填料高度低，流速相對就快，就像地鐵站早高峰，閘口多，通過(guò)速率快，閘口少，自然就擁堵，通過(guò)速率慢?？筛鶕悠坊|(zhì)類(lèi)型和使用習慣選擇合適柱管的小柱。

4) 溶劑順序加錯。對于反相類(lèi)型小柱，如果不小心把水當成活化溶劑，就會(huì )出現流速很慢的問(wèn)題，因為水對于疏水性反相填料的浸潤性是很差的，所以不小心把水當成甲醇來(lái)活化，可能等到花兒都謝了，它還是流不下來(lái)，注意別加錯哦。

5) 活化和平衡溶劑不互溶。比如二氯甲烷活化，水平衡小柱，大家就會(huì )發(fā)現，水加入后，流速也會(huì )慢到讓你崩潰。 這是因為水和二氯甲烷的互溶性差造成的，可以加入過(guò)渡溶劑甲醇來(lái)解決，甲醇既可以與二氯甲烷互溶也可以和水互溶。

6) 空氣進(jìn)入填料。這個(gè)原因比較常見(jiàn)但也是比較難發(fā)現的原因， SPE 小柱是由篩板，填料，柱管組成，不是有機的整體，所以在運輸尤其是長(cháng)途運輸的過(guò)程中，就會(huì )出現微小的松動(dòng)，導致空氣進(jìn)入填料，一般不容易被肉眼所發(fā)現。含有空氣的填料在氣壓的作用下導致活化溶劑流下速度很慢。說(shuō)到這大家可能就容易理解為什么同一批次的小柱，會(huì )出現輕微的流速參差不齊的情況，可以用 SPE 裝置加正壓的方式抽掉空氣后，再一起加溶劑。

上樣

     由于樣品基質(zhì)的復雜性，篩板孔徑在 20um，在上樣之前需要把顆粒物給過(guò)濾掉，比如含蛋白的樣品需要加酸、鹽、有機溶劑、加熱等方式將蛋白處理掉；對于一般的基質(zhì)，應采用過(guò)濾，離心或者高速離心，換大孔徑填料等方式進(jìn)行處理，現在好多第三方檢測單位樣品量非常多，但是該做的前處理步驟不能省，否則對儀器的損壞，對數據的可靠性都會(huì )有一定的影響。

淋洗和洗脫

      一般在淋洗和洗脫這兩步出現流速慢的情形比較少，因為淋洗和洗脫都是不帶基質(zhì)的純溶劑，一般上樣步驟沒(méi)有堵塞，就不會(huì )影響到淋洗和洗脫?？赡艹霈F流速慢的地方在于淋洗完小柱并干燥之后，因為一旦干燥小柱，就會(huì )使空氣進(jìn)入填料，這就回到了活化平衡導致流速慢的第 6 個(gè)原因，只要稍微加壓就可以解決問(wèn)題了。

     當然我們在做實(shí)驗的時(shí)候，不是每個(gè)步驟都要求快，魯迅說(shuō)過(guò)：欲速則不達，所以在小柱操作技巧里面，有兩個(gè)步驟是需要控制流速的， 分別是上樣和洗脫；這兩個(gè)過(guò)程是目標物與柱填料通過(guò)分子間作用力進(jìn)行吸附和解吸附的過(guò)程，需要時(shí)間慢慢作用，大家一定要注意呦！

這一次干貨時(shí)間就為大家分享到這里，

下次再見(jiàn)！