利巴韋林和金剛烷胺均屬于抗病du藥物,在人類(lèi)流感類(lèi)疾病防治領(lǐng)域應用廣泛。我國農業(yè)部560號公告明確規定抗病du藥物為禁用獸藥,但市場(chǎng)上非法添加的現象仍然存在,而一次性高效檢測這2種物質(zhì)卻是一大難點(diǎn)。
安譜實(shí)驗精心研究推出金剛烷胺/利巴韋林柱,可以同時(shí)分析檢測利巴韋林和金剛烷胺兩種目標物。通過(guò)一次實(shí)驗,分步洗脫的方式,分別收集得到兩種目標物。實(shí)驗驗證回收率和穩定性?xún)?yōu)異,而且流速適中,大大節省前處理時(shí)間,提高效率,降低檢測成本。
1前處理
前處理方法
稱(chēng)取雞肉、雞蛋基質(zhì)樣品2g,置15mL離心管中,加入內標混合溶液,再加入 5mL 0.25mol/L 乙酸銨溶液(pH=4.8) 和 40μL 100pm 酸性磷酸酶溶液,渦旋 30s,37° C 恒溫避光酶解 2h。在酶解液中加入 4mL 2% 三氯yi酸(pH=4.8)溶液,渦旋 30s,10000 r/min,離心 10min,移取上清液于另一離心管中,用 50% 氨水調 pH 至 8.5±0.1,加水定容至 10mL,再次離心,得到上層澄清提取液。取 5mL 提取液待上樣
活化平衡
5mL 乙腈、3mL 0.5% 甲酸水、3mL 0.25M 乙酸銨 (pH=8.5)
上樣
5mL 待上樣液
淋洗1
3mL 0.25M 乙酸銨 (pH=8.5)、3mL 水,抽干
洗脫1
2mL 0.5% 甲酸水,收集洗脫液,漩渦混勻后過(guò)濾膜,待 LC/MC/MC 檢測(利巴韋林)
淋洗2
3mL 甲醇,抽干
洗脫2
5mL 5% 氨化甲醇(含 10% 異丙醇),收集洗脫液(金剛烷胺)
濃縮
45 ° C水浴中氮吹近干,加 1mL 0.5% 甲酸水(含 10% 甲醇)定容,混合后,過(guò)濾膜,待 LC/MC/MC 檢測
2色譜條件
儀器:ACQUITY UPLC 超高效液相色譜儀,串聯(lián) AB 5500 型三重四極桿質(zhì)譜儀,配電噴霧離子源 (ESI)
洗脫程序:
目標物離子對:
3實(shí)驗譜圖
圖1 利巴韋林標準曲線(xiàn)
圖2 金剛烷胺標準曲線(xiàn)
圖3 標準品中利巴韋林峰(245.1/113.1)
圖4 標準品中 13C5-利巴韋林峰(250.1/113.1)
圖5 雞肉基質(zhì)加標過(guò) SBEQ-CA6535 利巴韋林峰
圖6 雞蛋基質(zhì)加標過(guò) SBEQ-CA6535 利巴韋林峰
圖7 標準品中金剛烷胺峰(152.2/135)
圖8 標準品中 D15- 金剛烷胺峰(167.2/150.1)
圖9 雞肉基質(zhì)加標過(guò) SBEQ-CA6535 金剛烷胺峰
圖10 雞蛋基質(zhì)加標過(guò) SBEQ-CA6535 金剛烷胺峰
4實(shí)驗結果
利巴韋林加標回收率
金剛烷胺加標回收率
結果討論: 安譜實(shí)驗開(kāi)發(fā)的柱基質(zhì)適用性良好,實(shí)驗回收率在 78%~112%,RSD 小于 10%,產(chǎn)品性能與進(jìn)口品牌相當,且流速更快大大節省時(shí)間。
5推薦耗材
微信掃一掃