使用保護柱可降低分析柱受污染的程度

來(lái)自于色譜系統的污染主要指，HPLC儀器系統中部件磨損而產(chǎn)生的固體顆粒，以及流動(dòng)相系統過(guò)濾不*殘留的固體顆粒。來(lái)自于樣品的污染主要指，未*溶解的樣品或者已*溶解的樣品進(jìn)入色譜系統中，由于樣品溶劑和流動(dòng)相溶劑對樣品溶解存在的溶解度差異，導致沉淀析出污染系統。

特別是對于中藥、天然產(chǎn)物、合成中間體及生物藥品的檢測，因基質(zhì)的復雜性，色譜柱受污染的情況會(huì )更加嚴重。污染會(huì )導致色譜系統壓力升高、色譜柱塌陷、填料變色等，從而帶來(lái)檢測成本高，測試結果不準確等各種影響。
 

保護柱是液相色譜分析中重要的色譜耗材，使用保護柱可大大降低分析柱受污染的程度，延長(cháng)分析柱使用壽命。

保護柱位于進(jìn)樣器與分析柱之間， 作用主要兩方面：

1. 截留不溶性顆粒 

2. 吸附樣品基質(zhì)中的雜質(zhì)

以下幾種情況建議使用保護柱：

1. 中藥、天然產(chǎn)物及合成中間體等基質(zhì)較復雜的樣品分析——因溶解性差異導致樣品析出而污染分析柱的情況比較嚴重，梯度洗脫時(shí)影響更大。

2. 生物樣品分析——因樣品的不可逆吸附導致的污染，保護柱可先于分析柱承受這種污染，從而延長(cháng)分析柱壽命。

 

保護柱很重要，但選擇合適的保護柱更重要，選擇或使用不當也可能帶來(lái)截然相反的效果。

保護柱分類(lèi)及選擇：

從材質(zhì)上分：不銹鋼材質(zhì)和PEEK（聚醚醚酮）材質(zhì)

PEEK 材質(zhì)優(yōu)缺點(diǎn)——樣品對金屬離子比較敏感時(shí)，選擇PEEK材質(zhì)比較合適，比如某些蛋白分析會(huì )用到PEEK材質(zhì)的分析柱，主要就是考慮到這方面的因素；

不銹鋼材質(zhì)優(yōu)缺點(diǎn)——大部分小分子化合物的分析，選擇不銹鋼材質(zhì)保護柱居多，特別是當流動(dòng)相體系使用到四氫呋喃（THF）或DMSO等一些溶解性較強的溶劑時(shí)，必須選擇不銹鋼材質(zhì)，甚至對于HPLC系統的管路也需要替換成不銹鋼材質(zhì)，因THF對于PEEK管路有相當強的腐蝕作用。

 

從結構上分：卡套式（柱芯+柱套）和直接填裝短柱

直接填裝短柱優(yōu)缺點(diǎn)——這種結構的保護柱實(shí)質(zhì)就是短的色譜柱，一般填裝的填料跟分析柱填料*一樣。生物樣品分析中，用這種類(lèi)型保護柱居多，除可過(guò)濾一些不溶顆粒外，還可除去一些在分析柱上易吸附的雜質(zhì)。缺點(diǎn)是，一次性使用，污染嚴重時(shí)，只能報廢。

卡套式保護柱優(yōu)缺點(diǎn)——卡套式保護柱的柱套可反復使用，柱芯污染后可替換，廠(chǎng)家會(huì )提供配套的保護柱芯，但購買(mǎi)時(shí)需要注意，柱芯中有與分析柱匹配的填料，需要確認柱芯中的填料類(lèi)型再購買(mǎi)。同時(shí)，柱芯和柱套需是來(lái)源于同一廠(chǎng)家的同一規格，否則，會(huì )存在匹配上的差異，導致峰型異?；蛘呗┮?。

從連接方式上分：獨立式和直連式

獨立式保護柱優(yōu)缺點(diǎn)

——保護柱和分析柱之間用一段管路連接，不用擔心與分析柱在連接上的匹配問(wèn)題。但使用管路連接時(shí)，連接不當容易產(chǎn)生死體積。

直連式保護柱優(yōu)缺點(diǎn)——保護柱接口帶螺紋，可直接與分析柱連接，死體積小，UPLC分析時(shí)建議選擇直連式保護柱；缺點(diǎn)：購買(mǎi)時(shí)需保證接口與分析柱匹配。

 

保護柱選擇考慮以下幾方面因素：

1. 除非特殊情況，一般選擇填料基質(zhì)與分析柱基質(zhì)*相同的保護柱。

2. 選擇保護柱尺寸可按柱體積計算，保護柱體積按分析柱體積的5%~10%即可；如4.6*250mm的分析柱體積約為4mL，保護柱體積可選擇在0.2~0.4mL之間為宜。同時(shí)，保護柱內徑應與分析柱內徑相同或相當。

 

保護柱使用注意事項：

1. 獨立式保護柱與分析柱連接時(shí)，連接管路盡可能短，且接口切面平滑，盡量減少死體積以降低柱外展寬效應。

2. 卡套式保護柱一般未標注液流方向，使用時(shí)自行標注，并按照標注方向來(lái)使用，以免正反向使用后，截留的雜質(zhì)污染分析柱。

3. 直接填裝的短柱型保護柱，出現柱壓升高或峰型變差時(shí)，可不接分析柱進(jìn)行反向清洗，清洗溶劑可參考分析柱清洗溶劑。

4. 卡套式保護柱，柱芯替換時(shí)，注意柱芯與柱套是否存在方向上的匹配，同時(shí)不易旋擰過(guò)緊，以防滑絲。

5. 保護柱或柱芯一般不建議超聲清洗，因可能對填料表面修飾有影響。

6. 如同一保護柱配不同的分析柱使用，每次使用前，保護柱需先清洗并用流動(dòng)相平衡保護柱一段時(shí)間后，再接分析柱使用。

保護柱與柱前過(guò)濾器的區別和使用：

使用保護柱的目的在于延長(cháng)分析柱的使用壽命，當分析柱造價(jià)昂貴時(shí)，保護柱的價(jià)值尤其能體現，某些情況下，當使用的分析柱本身價(jià)格便宜，保護柱并非必選，推薦使用柱前過(guò)濾器更合適。
 

柱前過(guò)濾器與保護柱兩者外形相似，差異主要在于：保護柱內芯裝有填料，而柱前過(guò)濾器內芯是可更換的濾片（一般為帶孔的不銹鋼燒結板）

因此，從結構可以推測使用上的差異：

柱前過(guò)濾器——通用性強，任何分析柱前都可使用，因其濾芯只起到過(guò)濾和截留雜質(zhì)的作用，濾片污染后可超聲清洗，反復使用。

保護柱——柱中填料除了起截留雜質(zhì)的作用外，也可除去樣品中易吸附的雜質(zhì)，這一點(diǎn)對生物樣品分析尤其重要。